慢性未解决的炎症是心血管疾病的主要决定因素。由于肥胖症的流行，确定射血分数保留型心力衰竭（heartfailurewithpreservedejectionfraction，HFpEF）中未解决的炎症的产生机制很有意义。为了研究肥胖表型及其直接/间接后果，采用多种方法利用脂蛋白受体（简称ALX）功能障碍小鼠模型。间接量热法（Indirectcalorimetryanalyses）显示ALX的缺失导致能量代谢失调，从而导致与年龄相关的肥胖。心功能数据表明易肥胖的ALX缺乏小鼠的心肌应变受损。对趋化因子、细胞外基质和致心律失常的综合测量证实，与WT小鼠相比，4个月龄时ALX-/-小鼠多离子通道基因表达失调，炎症趋化因子和细胞因子反应增强。白细胞的定量分析显示，在稳定状态下，脾和心脏中的促炎性Ly6ChiCCR2+巨噬细胞增加，导致脾、心脏发炎。轻微的炎症表现为心肾、内皮缺损，CD31和eNOS减少，iNOS和COX2表达增加。因此，ALX受体缺乏可作为一个实验模型，确定HFpEF的多种细胞和分子机制，可作为HFpEF治疗心血管疾病的靶点。
01Fig.1.ALX?/?小鼠引起早期肥胖和能量失衡。（A）研究设计总结的在WT和ALX-/-小鼠中肥胖性衰老的输入和输出参数。（B、C）显示食物摄入量和体重变化的点图。（D、E）间接量热法测得的白天和夜间的VO2和VCO2。（F）白天和夜间消耗的总能量（totalenergyexpenditure，TEE）的线性动力学图像。（G、H）脂肪和瘦组织质量变化的定量磁共振成像分析（quantitativemagneticresonanceimaging，QMRI）。（I、J）表示通过间接量热法测得的在2个月龄和4个月龄时，WT和ALX-/-小鼠的总能量消耗（totalenergyexpenditure，TEE），静止能量消耗（restingenergyexpenditure，REE）的点图。与2个月的ALX-/-组相比存在显著差异，*P0.05；与2个月的WT组相比存在显著差异，P0.05；n=4只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。
02Fig.2.ALX受体缺失后多水平的心功能不全。使用超声心动图测得的2个月龄和4个月龄时的WT和ALX?/?组参数：（A）舒张末期容积（EDV），（B）收缩末期容积（ESV），（C）整体纵向应变（GLS），（D）径向周向应变（RCS）（n=4-8只小鼠/组）。（E）用麦胚凝集素（WGA绿）染色的LV的代表性免疫荧光图像，显示4个月龄时WT和ALX?/?小鼠心肌细胞面积的变化。图像代表4-5个切片，n=4只小鼠/组。放大倍数为60倍，比例尺为25μm。
ECG参数：4个月龄时WT和ALX?/?小鼠的一次ECG搏动的（F）P持续时间，（G）R波，（H）Q波，（I）ST波和（J）图像。虚线表示QRS复合体中ALX?/?和WT之间的差异。
使用定制阵列分析4个月龄ALX?/?小鼠LV中（K）钠（Na2+）通道、（L）钾（K+）通道、（M）钙（Ca2+）通道、（N）心律失常基因表达变化的mRNA表达。通过将各个基因的表达相对于WT标准化来计算倍数变化。基因的mRNA表达归一化为HPRT、GAPDH和肌动蛋白的几何平均值；与4个月的WT组相比存在显著差异，*P0.05；n=4-6只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。
03Fig.3.ALX受体缺失在脾脏和心脏激活炎症免疫群。（A）4个月龄的ALX?/?和WT小鼠脾脏中活化巨噬细胞（Ly6C/CCR2）的代表性流式细胞术伪图。（B）WT和ALX?/?小鼠脾脏中Ly6ChiCCR2+表达的代表性重叠图。（C）柱状图显示4个月龄时WT和ALX?/?小鼠脾脏中的Ly6ChiCCR2+细胞群。（D）4个月龄的ALX?/?和WT小鼠心脏中活化巨噬细胞（Ly6ChiCCR2+）的代表性流式细胞术伪图。（E）WT和ALX?/?小鼠心脏中Ly6ChiCCR2+表达的代表性重叠图。柱状图显示4个月龄的WT和ALX?/?小鼠心脏中的（F）Ly6ChiCCR2+，（G）Ly6CloCCR2+，（H）Ly6ChiCCR2-细胞群。（I）饼状图代表在4个月龄时ALX?/?和WT两组中心脏的主要细胞群的不同百分比。每种颜色表示两组中相同的细胞总数百分比。与WT组相比存在显著差异，*P0.05；n=4-5只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。细胞群表示为每毫克组织的绝对细胞数。
04Fig.4.与年龄相关的肥胖表型失调的细胞因子、趋化因子和细胞外基质基因。（A）巨噬细胞运输和迁移趋化因子的mRNA表达。（B）通过STRING生成的面向CCL2的蛋白质-蛋白质相互作用网络。（C）TNFα超家族细胞因子mRNA的表达。（D）通过STRING产生TNFα超家族导向的蛋白质-蛋白质相互作用网络。（E）细胞外基质（ECM）沉积基因、（F）ECM降解基因、（G）ECM和细胞粘附分子基因的mRNA表达。基因的mRNA表达标准化为HPRT、GAPDH和肌动蛋白的几何平均值。与WT组相比存在显著差异，*P0.05；n=4只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。
05Fig.5.ALX的缺乏引起心肌内皮功能障碍。（A）LV免疫荧光图像显示ALX?/?小鼠CD31（红色）表达降低。图像上部为血管周围的CD31（红色）和F4/80（绿色）细胞，显示ALX?/?血管有少量巨噬细胞，CD31染色减少。图像下部显示没有血管的LV。黄色箭头表示CD31染色，白色箭头表示F4/80染色。WGA（紫色）用于标记细胞边界。细胞核用Hoechst（蓝色）染色。图像代表4-5个切片，n=4只小鼠/组。图像放大60倍，比例尺为25μm。（B）CD31LV蛋白表达的免疫印迹。（C）CD31的密度分析。（D）CD31的mRNA表达。（E）磷酸化（S）eNOS和总eNOS蛋白表达的免疫印迹。（F）光密度法分析磷酸化（S）eNOS/TeNOS。（G）eNOS、（H）iNOS和（I）COX-2的mRNA表达（J）
免疫印迹法检测iNOS、COX-2和GAPDH蛋白表达。密度测定分析（K）iNOS、（L）COX-2和（M-P）FFAR-1、-2、-3和-4的mRNA表达。在4个月龄的WT和ALX?/?小鼠的LV中测量基因和蛋白质表达。蛋白表达标准化为GAPDH，mRNA表达标准化为HPRT-1。与WT组相比存在显著差异，*P0.05；n=3-4只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。
06Fig.6.ALX?/?小鼠的肥胖会在4个月龄时加重肾脏和内皮功能障碍。（A）WT和ALX?/?小鼠肾脏的肾小球滤过率（GFR）和（B）肾脏注射FITC-sinistrin的Time-1/2。ALX?/?和WT小鼠肾脏中（C）皮质、（D）血管和（E）髓质WGA（绿色）-CD31（红色）染色的代表性免疫荧光图像。图像代表4-5个切片，n=4只小鼠/组。图像放大60倍，比例尺为50μm。WT和ALX?/?小鼠肾脏的（F）CD31、（G）eNOS、（H）COX-2和（I）iNOSmRNA基因表达的代表图。mRNA表达正常化为HPRT-1。与WT组相比存在显著差异，*P0.05；n=6只小鼠/组；数据均以平均值±SE表示。
本文以题为“Deficitofresolutionreceptormagnifiesinflammatoryleukocytedirectedcardiorenalandendothelialdysfunctionwithsignsofcardiomyopathyofobesity”于年3月发布在期刊FASEBJ上。论文链接：
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